Matthias Köhler studierte Theater-, Film- und Medienwissenschaften in Wien, wo er auch lebt. Nach einer Zeit als Regieassistent am Schauspiel Köln entstanden erste eigene Arbeiten und er leitete von 2016 bis 2018 im Kollektiv die Außenspielstätte Britney des Schauspiel Köln. Dort kuratierte er ein interdisziplinäres, queer*feministisches Programm und gründete das internationale Festival Britney X.

Matthias Köhler inszenierte bereits an zahlreichen deutschsprachigen Schauspielhäusern, zuletzt 2023 seine Romanbearbeitung Die Krise des jungen Törless nach Robert Musil am Staatstheater Stuttgart. Weitere Arbeiten entstanden am Theater Bonn, Basel, Bamberg und am TjG Dresden. Seine dortige aufgeführte Inszenierung von Movie Star (Raziel Ried) wurde 2020/21 zum Heidelberger Stückemarkt eingeladen. 2015 gründete er die Wiener Off-Gruppe wirgehenschonmalvor, mit der er kontinuierlich Projekte realisiert. Zuletzt hat er mit Bent (2022) am Theater Nestroyhof für Aufsehen gesorgt. Die Produktion ist in zwei Kategorien (Beste Off-Produktion, Bester Schauspieler) für den Nestroypreis 2023 nominiert.